如何为抗体“减重”？ ——还原一个完美的IP实验结果

春节回来，宝宝们都“兴高采烈”地回到了自己的工作岗位。。。。。  

不仅回来了，还圆滚滚地回来了~~~~

每逢佳节胖三斤，假期已过，减肥计划是不是也要提上日程啦？

老生常谈，总结来说就是：
管住嘴的同时也要迈开腿啊！
大家加油哦~哈哈
减重说简单不简单，说难也不难哦，不信你看看抗体减重历险记！

最近售后小哥哥收到咨询，有老师做完IP实验跑WB的结果图，杂带太多，目的条带在50kd，但是在50kd左右有太多的条带，不知道哪个条带是目的条带？售后小哥哥看完，一副胸有成竹的样子…….

首先让小优带大家来捋一捋：

问题一：什么是IP实验？
IP实验就是免疫沉淀实验，是利用抗原和抗体的特异性结合以及细菌蛋白质的“protein A/G"可以特异性地结合到抗体的FC端的现象开发出来的方法。目前多用protein A/G预先结合在argarose beads上，使之与含有抗原的溶液及抗体反应后，beads上的prorein A/G就能达到吸附抗原的目的。通过低速离心，可以从含有目的抗原的溶液中将目的抗原与其它抗原分离。IP实验拉出我们理想中的目的蛋白后，通常我们会跑电泳，做WB进行实验验证 。

问题二：为什么IP后的WB实验会有杂带干扰？
IP实验收集到的组分经过含巯基乙醇的加样缓冲液以及煮沸变性和离心等方法去除Protein A/G beads后，EP管中只有抗体和目的蛋白以及少量非特异性吸附蛋白。我们上样跑胶时SDS-PAGE中就含有目的蛋白和抗体二种蛋白，由于加样缓冲液中含有的巯基乙醇使抗体的重链与轻链之间的二硫键被破坏从而使得抗体分子变成重链分子（55KD）和轻链分子（25KD）。IP和WB的操作过程中通常会用到相同的一抗或同种属来源的一抗，这种情况下，如果使用常规的Anti-IgG（H+L）酶标二抗，WB实验中IP抗体变性后产生的重链（55kDa）和轻链（25kDa）都能够被识别， 而此非特异的信号往往会部分甚至完全掩盖目的蛋白的信号。

问题三：如何区分目的条带？跑出一条好看的条带，发高质量的文章？
其实你只要选择一款合适的二抗就行啦~

A:使用正常的二抗如：Goat anti-Mouse IgG（H+L）
B: 特异性识别抗体轻链的二抗（Anti‑Light Chain-Specific Antibodies for Western Blotting after IP）如：115-035-174  Peroxidase AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG, Light Chain Specific

如果使用这款只识别抗体轻链的二抗（Anti‑Light Chain-Specific Antibodies），抗体重链就不会干扰我要的目的条带啦~

【可是 ~But~，如果我的目的条带在25kd左右的位置，咋办？？？】

别担心，小优也有一款Conformation Specific二抗，轻松避免重轻链干扰！这一款二抗即不识别重链，也不识别轻链！ 有了这2种二抗，老板再也不用担心，我跑出来的目的条带是抗体重链或轻链产生的假阳性干扰啦~

这么有才、有毅力，又健康“减重”的抗体来自哪家呢？
【Jackson——一家只生产二抗的专职供应商】

主要产品线：
1. Whole IgG Affinity-Purified Antibodies（种属最全，应用最广泛）
2. F(ab')₂ Fragment Affinity-Purified Antibodies（避免Fc非特异性结合）
3. Fab Fragment Affinity‑Purified Antibodies（一抗来源相同的多标实验、封闭内源性Ig G）
4. Brilliant Violet™ Dye Conjugates for Multiple Labeling（5色荧光成为可能）
5. Anti-Mouse IgG Subclass Specific Antibodies（识别小鼠不同亚型）
6. Alexa Fluor® 680 and Alexa Fluor® 790 for High Sensitivity Western Blots（荧光WB）
7. Colloidal Gold-Antibody Complexes（胶体金二抗）
8．Streptavidin and Conjugates（链霉亲和素偶联信号放大）
9. Anti‑Light Chain-Specific Antibodies for Western Blotting after IP（IP后WB）
10. FabuLight™ - Affinity-Purified Fab Anti-Fc Fragment Specific Antibodies（特异性识别重链Fc端）

优势：种属最多，标记最全、应用最广----性价比超高的一款二抗
ELISA、常规WB、荧光WB、IP后WB、单染IF、二色三色多染IF、流式FC、识别不同IgG亚型、封闭用二抗、一抗来源相同的双染

惊喜有礼：为了更好的服务科学家，加速科研成果的产出，小优自2018年起常备多种Jackson二抗现货供大家选择，清单如下：

如果您想要的二抗不在备货清单内，别着急，为了更快给科学家们供货，小优排除万难，已将Jackson货期提前到2-3周啦~

对于一次性下单3支及以上的Jackson二抗（优宁维官网下单更快捷高效），可赠送一本价值5美金的Jackson目录册，如有问题或更多二抗选择可咨询电话： 4008-168-068； 邮箱：chengzq@univ-bio.com